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DSE 生物|生物工程 备课指引(导师用)|PCR、电泳与基因转移

DSE 生物|生物工程 备课指引(导师用)|PCR、电泳与基因转移

  • 2026-11-01

学生把 PCR 当成“复制 DNA”,但讲不出三十个循环之后有几多份。这一堂要用指数把抽象变数字:每循环加倍,三十循环就是十亿倍。

本堂目标 学生能够:① 用 2ⁿ 算 PCR 放大倍数;② 由凝胶电泳的条带位置判断片段大小;③ 讲出限制酶、载体、接合酶三步的次序与目的,并算转化效率。

01 先备知识(开课前 3 分钟快检)

以下任何一项未过关,本堂就会卡住,先补该项:

技能 快检题 过关标准
指数 2 的 10 次方 1024
碱基配对 A 配什么 T
酶 酶的作用是什么 降低活化能、专一

02 课堂流程(60 分钟)

时间 环节 导师做什么 学生做什么
0–8 分 温故:DNA 结构 A-T、G-C 写出配对
8–20 分 PCR 三温 变性、退火、延伸 讲出温度次序
20–32 分 指数放大 30 个循环 1.07e+09 倍
32–44 分 凝胶电泳 细片段行得快 比较三条带
44–54 分 限制酶与载体 切、接、入 效率 2000 群落/µg
54–60 分 离场检查 三题收回即批 独立完成

03 讲解脚本(照着说就可以)

第一幕:PCR 就是每次加倍,三十次之后已经失控地多

一个循环变两份,30 个循环就是 2^30 = 1.074e+09,即约十亿倍。导师要学生先算 2 的 10 次方(1024),再三乘十次,比死记答案清楚。

板书重点:PCR 就是每次加倍,三十次之后已经失控地多

第二幕:电泳只看一件事:大小

凝胶是筛,DNA 带负电向正极走;片段越细,穿过孔越快,走得越远。2000 bp 留在上面,500 bp 走到下面,同一条 lane 两条带就是两个不同大小的产物。

板书重点:电泳只看一件事:大小

第三幕:基因转移三步不能乱序

限制酶切开载体与目标基因(留下 sticky end)→ 接合酶封口 → 送入细菌。若 0.1 µg DNA 长出 200 个群落,转化效率就是 2000 群落/µg。碱基组成也要一致:A 占 30%,T 亦是 30%,剩 40% 由 G 与 C 平分,各 20%。

板书重点:基因转移三步不能乱序

04 必教题型与步骤

题型 例子 步骤 答案
计算 PCR 放大倍数 2ⁿ 1.07e+09
判断 电泳条带 越细走得越远 500 bp 在最下
计算 碱基比例 A=T、G=C G 20%
计算 转化效率 群落 ÷ µg 2000/µg
合理性检查(一定要教):2 的次方要用计算机或对数,不可估。bp 是长度单位不是重量,电泳分的是长度不是质量。转化效率的分母是加入的 DNA 质量(µg),不是培养基体积。

05 独立练习三题

题目 答案 想观察什么
30 个循环的放大倍数 1.07e+09 2^30
A 占 30%,G 占几多 20% (100−60)÷2
0.1 µg DNA 得 200 群落,效率 2000/µg 200÷0.1
2000 bp 与 500 bp 哪条走得远 500 bp 细片段快

06 学生常见错误与纠正句

错误 学生通常这样写 导师这样说
PCR 算成线性增长 30 循环 = 30 倍 “每个循环系乘二,不系加一,所以系十亿倍。”
以为大片段走得远 指 2000 bp 在最下 “凝胶系筛,越大越卡住,大片段留在上面。”
次序倒转 先接合再切 “要先切出 sticky end 才接得上,倒转就接不埋。”
转化效率用体积做分母 除以 1 cm³ “分母系 DNA 质量 µg,不系液体体积。”

07 家课建议(直接指到练习卷题号)

08 离场检查(最后 5 分钟)

题目 答案 判定
2^30 1.07e+09 错=重练指数
电泳哪条带最远 最细的片段 错=重讲筛
0.1 µg 得 200 群落的效率 2000/µg 错=重讲分母

09 导师常问

PCR 为何要三个温度?

变性断氢键、退火让引子贴上、延伸让聚合酶复制,温度次序不能乱。

为何要用限制酶而不是随机剪?

限制酶只在特定序列切,切口一致才接得返同一个位。

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