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DSE 生物|基因工程與生物科技 備課指引(導師用)|PCR 倍增、電泳判讀與轉化率

DSE 生物|基因工程與生物科技 備課指引(導師用)|PCR 倍增、電泳判讀與轉化率

  • 2026-11-03

學生識講「基因工程」,但一問循環幾次、條帶誰快就啞。這一堂用兩個數字——104 萬倍與 1.2%——把流程變成可算的答案。

本堂目標 學生能夠:① 用 2^n 算 PCR 循環後的 DNA 拷貝數,解釋為何 20 至 30 個循環已足夠;② 由凝膠電泳條帶位置比較片段大小,說明泳動距離與片段的關係;③ 用成功轉化細胞數除以處理細胞數算轉化率,並列舉三個影響因素。

01 先備知識(開課前 3 分鐘快檢)

以下任何一項未過關,本堂就會卡住,先補該項:

技能 快檢題 過關標準
指數 2 的 20 次方是多少 1,024 × 1,024
鹼基配對 A 配甚麼 A 配 T、G 配 C,黏性末端互補
百分比 12 除 1000 0.012 即 1.2%

02 課堂流程(60 分鐘)

時間 環節 導師做什麼 學生做什麼
0–8 分 三個工具 限制酶、載體、宿主 講清各自角色
8–20 分 切與接 EcoRI 切 GAATTC 黏性末端 AATT
20–32 分 PCR 倍增 三溫度、每循環加倍 20 循環 1,048,576 倍
32–44 分 電泳判讀 條帶位置對大小 2.5 kb 較近加樣孔
44–54 分 轉化率 成功數除處理數 12 ÷ 1000 = 1.2%
54–60 分 離場檢查 三題即場批 三題全對

03 講解腳本(照著說就可以)

第一幕:三個工具三件事

限制酶認特定序列:EcoRI 認 GAATTC,在 G 與 A 之間切開,留下 AATT 黏性末端。用同一種酶切載體與目標基因,兩邊末端互補,接合酶才接得上——這是全章最容易被忽略的前提。
載體要具備三個條件:有多個限制酶切位、能在宿主內自我複製、帶選擇標記(例如抗抗生素基因)。沒有標記,就分不出哪些細胞真的攝入了載體。
整個流程可以講成三步:切、接、選。每一步都對應一個可考的失敗原因。

要學生講:為何要用同一種限制酶切載體與目標基因(末端互補)。

第二幕:PCR 是倍增不是加法

PCR 三個溫度步驟:94°C 變性(雙鏈分開)、55°C 退火(引子結合)、72°C 延伸(聚合酶複製)。每完成一循環,拷貝數加倍,n 個循環後是 2^n。
20 循環 = 2²⁰ = 1,048,576 倍,一條變一百萬條;30 循環 = 1,073,741,824 倍,約十億倍。所以微量樣本(如一根頭髮)都夠做分析。
但循環不是越多越好:非特異產物同樣被放大,酶活力下降,誤差累積,實務多取 25 至 35 循環。

要學生講:為何 20 循環已經由 1 條變 100 萬條(每次加倍)。

第三幕:電泳與轉化率:兩個可算的檢查

DNA 帶負電,在電場中由負極游向正極;凝膠的網孔像篩,片段越小越易穿過,走得越快越遠。同一塊膠上,2.5 kb 條帶比 0.8 kb 更靠近加樣孔——這是最常被答反的一格。
轉化率 = 成功轉化細胞數 ÷ 處理細胞數:1,000 個細胞處理後得 12 個成功,轉化率 1.2%。分母是處理過的總數,不是成功數。
影響因素至少講三個:載體大小(越大越難進入)、熱震或電穿孔處理、抗生素篩選濃度(太高會連成功轉化的也殺死)。

要學生講:為何大片段走得較慢(凝膠網孔阻礙)。

04 必教題型與步驟

題型 例子 步驟 答案
計算 PCR 拷貝數 2^n,n 為循環數 20 循環 1,048,576
判讀 電泳條帶比較 小片段走得遠、近正極 2.5 kb 較近負極
計算 轉化率 成功數 ÷ 處理數 × 100% 1.2%
論述 基因改造的應用與風險 應用、風險、監管三段 各舉兩例
合理性檢查(一定要教):拷貝數是 2 的循環次方,不是 2 乘循環數。
電泳方向由負極向正極,DNA 帶負電。
轉化率的分母是處理過的細胞總數,不是成功數。
kb 即千個鹼基對,2.5 kb 大於 0.8 kb,走得較慢。

05 獨立練習三題

題目 答案 想觀察什麼
20 循環後的拷貝倍數 1,048,576 2 的 20 次方
1,000 個細胞中 12 個成功轉化 1.2% 12 ÷ 1000 × 100%
2.5 kb 與 0.8 kb 哪個較近加樣孔 2.5 kb 大片段泳動較慢

06 學生常見錯誤與糾正句

錯誤 學生通常這樣寫 導師這樣說
把 PCR 當線性增長 20 循環答 40 倍 「每循環係倍增,20 循環係 2 的 20 次方。」
電泳方向講反 答「DNA 游向負極」 「DNA 帶負電,由負極游向正極。」
轉化率分母用錯 12 ÷ 12 = 100% 「分母係處理嘅 1,000 個細胞。」
大片段當走得快 答 2.5 kb 走得最遠 「凝膠有網孔,越大越難行,走得越短。」

07 家課建議(直接指到練習卷題號)

08 離場檢查(最後 5 分鐘)

題目 答案 判定
20 循環的倍數 1,048,576 三題全對=可進論述題
轉化率 1.2% 錯一題=重講分母
哪個片段較近加樣孔 2.5 kb 錯兩題以上=回到第三幕

09 導師常問

要背 PCR 三個溫度嗎?

要,94/55/72°C 對應變性、退火、延伸,題目常直接問步驟。

為何用抗抗生素基因做標記?

只有攝入載體的細胞能在含抗生素培養基生長,其餘被淘汰。

基因改造一定有害嗎?

要分開講:產量與藥物生產是應用,基因漂移與生態影響是風險。

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